1. Принцип разделения

Хроматография на колонке с силикагелем обеспечивает разделение на основе различий в адсорбционной способности веществ на силикагеле. Вещества с более высокой полярностью легко адсорбируются силикагелем, тогда как вещества с более низкой полярностью — нет. Весь процесс представляет собой цикл «адсорбция → десорбция → повторная адсорбция → повторная десорбция».

2. Выбор подвижной фазы

Различные растворительные системы подбираются в соответствии с полярностью веществ, и проблемы с хвостовыми следами можно решить целенаправленно:

• Для веществ с низкой полярностью используется система этилацетат : нефтяной эфир.

• Для веществ с относительно высокой полярностью используется система метанол : хлороформ.

• Для веществ с высокой полярностью используется система метанол : вода : н-бутанол : уксусная кислота.

• При возникновении хвостов добавляют небольшое количество аммиачной воды или ледяной уксусной кислоты.

3. Основные операционные шаги (8 шагов)

1. Взвешивание Выберите силикагель с размером частиц 200–300 сеток; дозировка составляет 30–70 раз от объёма образца, загружаемого в колонку. В случае чрезвычайно сложного разделения используется количество силикагеля H, в 100 раз превышающее указанное; (явная плотность сухого силикагеля составляет около 0,4; например, 40 г силикагеля можно измерить как 100 мл мерным стаканчиком).

2. Приготовление суспензии Добавьте растворитель в том же объёме, что и сухой силикагель, и перемешайте (например, если элюент представляет собой систему нефтяной эфир/этилацетат/ацетон, смешайте с нефтяным эфиром; если это система хлороформ/спирт, смешайте с хлороформом). Растворитель должен быть сухим (для этилацетата/ацетона используется безводный сульфат натрия, а для хлороформа — безводный хлорид кальция). Для образцов, чувствительных к кислотам, избегайте использования системы на основе хлороформа.

3. Наполнитель колонки Тщательно закройте дно колонки ватой, добавьте 1/3 объёма нефтяного эфира (или хлороформа), установите колбу для хранения жидкости, открыть поршень, сразу же залейте суспензию в колонку и промойте остатки силикагеля в колбе для хранения жидкости растворителем.

4. Уплотнение После того как силикагель оседает, добавьте ещё нефтяного эфира и создайте давление с помощью двойного пузыря или воздушного насоса до тех пор, пока скорость потока не станет постоянной. Слой колонки уплотняется до 9/10 от его первоначального объёма (это может улучшить разрешение и предотвратить растрескивание слоя колонки).

5. Загрузка образца Можно использовать как сухой, так и мокрый метод; морской песок не требуется. После загрузки образца добавьте небольшое количество элюента, а затем вставьте шарик абсорбирующей ваты близко к поверхности силикагеля, чтобы предотвратить повреждение силикагеля при последующем добавлении элюента.

6. Прохождение и сбор столбца Рекомендуется градиентная элюция (для балансировки диффузии и разделения). Пример: при загрузке образца 10 мг используется 0,5 мл на фракцию; при загрузке образца 1–2 г используется 20–50 мл на фракцию.

7. Обнаружение Предпочтительны специальные спрей-проявители (их чувствительность на 1–2 порядка выше, чем у УФ-ламп, что снижает потери продукта).

8. Подача спектроскопии Соберите продукт, прокрутите его до высыхания и повторно кристаллизуйте перед отправкой на спектроскопию. Если образец маленький или находится в жидкой форме, пропустите его через небольшую гелевую колонку, чтобы удалить «пик силикагеля» примерно на 1,5 ppm в спектре водорода.

4. Операционные меры предосторожности

• Наполнитель колонки Не наносите смазку на поршень (во избежание загрязнения продукта). Колонка должна быть «достаточно плотной и равномерной», при этом трещины недопустимы (поскольку они влияют на разделение или даже делают колонку непригодной для использования). Мелкие пузырьки воздуха можно устранить путём повышения давления; для предотвращения частого образования пузырьков требуется дополнительная практика.

• Добавление образца Перед загрузкой растворите образец небольшим количеством растворителя. Дождитесь, пока слой растворителя опустится до поверхности кварцевого песка, и повторите процесс 2–3 раза с небольшим количеством малополярного растворителя. При добавлении элюента не оказывайте давление сразу; дождитесь, пока расстояние между слоем растворителя и слоем образца достигнет 2–4 см, прежде чем начать давление, чтобы предотвратить быстрое перемещение образца вниз.

• Выбор элюента Значение Rf для целевого вещества должно составлять 0,2–0,3. Когда Rf = 0,6, даже разница в 0,2 делает разделение сложным. Это связано с тем, что колонка подвергается многократным процессам перемещения по ступеням, и более низкое значение Rf приводит к лучшей эффективности разделения.

• Отбор образцов Вещества с сильной адсорбцией могут элюироваться позже (в то время как вещества с слабой адсорбцией элюируются первыми). В качестве неподвижной фазы вместо этого можно использовать оксид алюминия. Размер пробирки должен соответствовать объёму образца (для малых образцов следует использовать маленькие пробирки, чтобы избежать одновременного сбора нескольких образцов).

• Окончательное лечение Продукты, разделённые по колонке, необходимо промыть небольшим количеством растворителя (чтобы удалить примеси, растворённые в растворителе); при необходимости провести повторную кристаллизацию. Лёгкие растворители (эфир, дихлорметан) или высокая температура помещения способствуют образованию пузырьков; вместо них можно использовать растворители с высокой температурой кипения. Для смешанных растворителей следует выбирать те, у которых близкие температуры кипения (например, этилацетат + нефтяной эфир с температурой кипения 60–90℃). Перед загрузкой колонки необходимо полностью удалить воздух путём создания давления.

Я могу помочь вам перевести «основные операционные шаги» или «соответствие полярности подвижной фазы» в наглядную таблицу на английском языке, что удобно для быстрой проверки операционных деталей раздела веб-новостей. Вам это нужно?

Новости и информация, публикуемые компанией Zhonglian Chemical, предоставляются исключительно в информационных целях и предназначены только для ознакомления и обмена данными между профессионалами отрасли. Компания не гарантирует точность и полноту такой информации. Вы не должны использовать эту информацию в качестве замены собственного независимого суждения; следовательно, вы несёте все риски, возникающие при использовании данной информации, и компания Zhonglian Chemical не несёт ответственности за такие риски. В случае нарушения прав просим связаться с нами для удаления соответствующего контента.